EHA101化学转化感受态使用说明
² 产品简介
本品为农杆菌EHA101（基因型：C58 (rifR) Ti pEHA101 (pTiBo542 D T-DNA) (kanR) Nopaline）制作的感受态；菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA101 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pEHA101 (pTiBo542DT-DNA) 型Ti质粒含有筛选标签：kan，赋予EHA101菌株卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作。经pK7WGF2质粒（11876bp，壮观霉素抗性SpecR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
EHA101化学转化感受态 | AT008-H-S | 10×100 μL |
| AT008-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒（约500 ng），轻弹使混合均匀；
2. 冰中孵育5 min，液氮中放置5 min，放37℃水浴锅中热激5 min，立即插入冰中静置5 min；
3. 添加900 μL YEB液体培养基，28℃摇床220 rpm培养2-3 h；
4. 5000 rpm离心，倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，28℃培养箱放置2-3天。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 利福平使用浓度<25 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。