ET12567(pUZ8002)化学转化感受态使用说明

²  产品简介

本品为大肠杆菌ET12567(pUZ8002)（基因型：F-dam-13::Tn9dcm-6hsdMhsdRzjj-202::Tn10recF143galK2galT22ara-14lacY1xyl-5leuB6thi-1tonA31rpsL136hisG4tsx-78mtl-1glnV44）制作的高效感受态，ET12567(pUZ8002)在培养的过程中加入25 µg/ml 氯霉素和25 µg/ml 卡那霉素有助于维持细胞内的伴侣质粒存在。

ET12567(pUZ8002)主要用来进行链霉菌基因操作过程中，利用结合转移的方法将基因导入到链霉菌中，链霉菌基因敲除或者基因倍增过程中全球通用和认可的菌株。

ET12567(pUZ8002)是甲基化缺陷型菌株。大部分链霉菌能够通过甲基修饰系统区分出自身DNA和外来DNA，所以需要转入到链霉菌中的质粒都必须利用ET12567(pUZ8002)通过结合转移的方法进入链霉菌体内。如果使用的链霉菌不含有甲基化修饰系统，那么使用DH5a(pUZ8002)菌株也是可以完成结合转移的。

pUZ8002质粒含有tra基因，能够编码转移蛋白Tra，从而实现基因DNA转移。

ET12567(pUZ8002)配套使用载体是pSET152和pKC1139。

²  产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

²  转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

²  注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3.应用于链霉菌基因操作。