K599化学转化感受态使用说明
² 产品简介
本品为农杆菌K599（基因型：Agrobacterium rhizogenes (strR) pRi2659 (agropine type)）制作的感受态，发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌，它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。K599发根农杆菌（NCPPB2659）含有pRi2659农杆碱型Ri质粒，具有广泛的宿主范围（葫芦科，豆科，茄科等），同时具有链霉素抗性。经pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>103 cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
K599化学转化感受态 | AT006-H-S | 10×100 μL |
| AT006-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒（约500 ng），轻弹使混合均匀；
2. 冰中孵育5 min，液氮中放置5 min，放37℃水浴锅中热激5 min，立即插入冰中静置5 min；
3. 添加900 μL YEB液体培养基，28℃摇床220 rpm培养2-3 h；
4. 5000 rpm离心，倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，28℃培养箱放置2-3天。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 利福平使用浓度<25 μg/ml，庆大霉素使用浓度<50 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；Ti质粒丢失概率极低，可不用庆大霉素，以提高转基因效率。
4. K599具有链霉素抗性，不可用于具有链霉素抗性质粒的转化。
5.该菌株能够耐受氨苄青霉素，建议勿选择氨苄青霉素抗性基因质粒的转化。