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MC1061F-

使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌MC1061F-(基因型:araD139 Δ(araA-leu)7697 Δ(lac)X74 galK16 galE15(GalS) λ- e14- mcrA0 relA1 rpsL150(StrR) spoT1 mcrB1 hsdR2)制作的高效感受态,菌株来源于E.coli B/r型SB3118菌株,同时也是DH10b及TOP10的母本菌株。MC1061F-化转感受态细胞转化效率极高,可用作实验室的常规质粒构建及噬菌体展示实验,但缺乏F`因子,不能用于丝状噬菌体(比如 M13)的感染。不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶对质粒的污染。此菌株具有链霉素抗性。 MC1061F-感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>109 cfu/μg DNA。

 

² 产品规格

 

品名

货号 

规格

MC1061F-化学转化感受态

EC020H-S

10×100 μL


EC020H-M

50×100 μL

保存条件:-80℃(12个月)

 

² 转化方法

1. -80 冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min

2. 42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min 

3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min

4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。

 

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。

2.不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。

3.质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。