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JM330

使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌JM330(基因型:F- φ80 lacZM15 (lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ- thi-1 gyrA96 relA1 tonA)制作的高效感受态,来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA,赋予其抗噬菌体 T1T5的能力,即为JM330JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板,广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶(endA1)和重组酶(recA1),提高了质粒DNA的产量和质量;lacZΔM15 的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。JM330感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒(2686bpAmpR)检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA

 

² 产品规格

 

品名

货号 

规格

JM330化学转化感受态

EC018H-S

10×100 μL


EC018H-M

50×100 μL

保存条件:-80℃(12个月)

 

² 转化方法

1. -80 冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min

2. 42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min 

3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min

4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。

 

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。

3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。