使用说明
² 产品简介
本品为大肠杆菌JM330(基因型:F- φ80 lacZ∆M15 ∆(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 λ- thi-1 gyrA96 relA1 tonA)制作的高效感受态,来源于DH5α菌株。在DH5α大肠杆菌基因组中引入tonA,赋予其抗噬菌体 T1、T5的能力,即为JM330。JM330菌株最大的特点是其可以在体内特异性降解甲基化质粒模板,广泛应用于各种DNA定点突变试验中。JM330菌株缺失核酸内切酶(endA1)和重组酶(recA1),提高了质粒DNA的产量和质量;lacZΔM15 的存在使JM330可用于蓝、白斑筛选。JM330感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
JM330化学转化感受态 | EC018H-S | 10×100 μL |
| EC018H-M | 50×100 μL |
保存条件:-80℃(12个月)
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min;
4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。