使用说明

一、产品简介

本品为大肠杆菌DH10Bac [基因型：F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) ϕ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ^- rpsL

nupG /pMON14272 / pMON7124]制作的高效感受态。DH10Bac 菌株主要用于生产重组杆状病毒分子（Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统）。该菌株中含有父本杆粒

bMON14272 、辅助质粒 pMON7124 ：父本杆粒 bMON14272 包含 mini-F 复制子, 卡那抗性基因, attTn7 位点和lacZα互补因子；辅助质粒 pMON7124 含有 tnsABCD 区（tnsABCD region supplies the transposition proteins

required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid），具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒pFastBac（具有庆大霉素抗性）转化后的基因转座效率。mcrA、mcrBC及mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA（Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10Bac）。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ϕ80lacZΔM15 的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选；pUC19 质粒检测转化效率>10⁸ cfu/μg DNA。

二、产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

三、转化方法

供体质粒（pFastBac 等）转化重组方法：

1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入供体质粒（pFastBac 等）1 ng，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激45s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养4 h；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，平板包含 50ug/ml Kan，7ug/ml Gentamicin，7ug/ml tetracycline，40ug/ml X-gal，40ug/ml IPTG，37℃培养箱放置48 h。

pUC19 检测转化效率方法：

1. 从-80℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激45s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养1 h；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。