使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌BJ5183-AD-1（基因型：endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR (StrR) [pAdEasy-1 (AmpR)]）制作的高效感受态，是携带了腺病毒质粒 pAdEasy-1的BJ5183菌株。BJ5183菌株是一种具有较高重组活力的大肠杆菌菌
株，是目前腺病毒系统最常用的感受态细胞。BJ5183菌株含有sbcBC recBC双重突变，赋予BJ5183细胞较强的重组能力，有利于转入的目的基因与腺病毒骨架质粒的重组。endA1（缺失核酸内切酶）的突变有利于重组DNA的稳定和
高纯度质粒DNA的提取。BJ5183-AD-1菌株细胞中已经提前转入了腺病毒质粒 pAdEasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]，赋予该菌株氨苄抗性，在病毒 质粒构建时，只需转入线性化的目的质粒即可，简化了实验步骤，提高了病毒质粒重组概率。StrR赋予BJ5183-AD-1菌株链霉素抗性。BJ5183-AD-1 感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBI A2301质粒(size:1163bp，KanR)检测转化效率>1×105 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
BJ5183-AD-1化学转化感受态 | EC002H-S | 10×100 μL |
| EC002H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；
4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。
4. BJ5183-AD-1菌株的质粒产量不高。腺病毒构建成功后，可选择在其他大肠杆菌菌株中扩繁，纯化质粒。