使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌Tuner(DE3)pLysS{基因型：F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)pLysS CamR}制作的感受态。该菌株是BL21菌株的lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突变株，此突变导致IPTG以均一速度进入大肠杆菌的每个细胞，产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3) pLysS，pLysS表达T7溶菌酶，T7溶菌酶可以与T7 RNA 聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达，非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3 区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌 RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，
AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
Tuner(DE3)pLysS化学转化感受态 | EE036-H-S | 10×100 μL |
| EE036-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床200 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。