使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌ER2566{基因型：F- λ- fhuA2 [lon] ompT lacZ::T7 gene1 gal sulA11 Δ(mcrC-mrr)114::IS10 R(mcr-73::miniTn10-TetS)2 R(zgb-210::Tn10) (TetS) endA1 [dcm]}制作的感受态。该菌株是NEB公司开发的具有超高转化效率的蛋白表达原核菌株，来源于BL21。Lac启动子启动下游T7RNA聚合酶的表达，可用于T7启动子表达载体(如pET系列)的高水平蛋白表达。fhuA2赋予ER2566菌株对噬菌体T1的抗性。同时ER2566为lon和ompT蛋白酶缺陷菌株。Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺失能够有效抑制表达的异源蛋白在大肠杆菌体内的降解，Δ(mcrC-mrr)114，mcr-73突变的存在使ER2566菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的转化效率。ER2566感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>109 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
ER2566化学转化感受态 | EE015-H-S | 10×100 μL |
| EE015-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。