使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌ArcticExpress(DE3)pRARE2{基因型:E. coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)}制作的感受态。该菌种来源于ArcticExpress (DE3),将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3) pRARE2 菌株具有四环素,庆大霉素,氯霉素抗性,endA1突变有利于质粒DNA的稳定。[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60 伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性,在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。同时,pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>108cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
ArcticExpress(DE3)pRARE2化学转化感受态 | EE002-H-S | 10×100 μL |
| EE002-H-M | 50×100 μL |
-80℃(12个月)
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min;
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。