Biorabbit-LBA4404化学转化感受态使用说明
² 产品简介
本品为农杆菌LBA4404(基因型:Ach5 (rifR) Ti pAL4404 (strepR) Octopine)制作的感受态,菌株为 Ach5 型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因 rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的章鱼碱型Ti质粒pAL4404,此质粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pAL4404质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA 顺利转移)。pAL4404型Ti质粒含有筛选标签:strep,赋予LBA4404菌株链霉素抗性,适用于菸草、番茄、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的LBA4404化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒检(12739bp,KanR)检测转化效率>104cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
LBA4404化学转化感受态 | AT004-H-S | 10×100 μL |
| AT004-H-M | 50×100 μL |
保存条件:-80℃(12个月)
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒(约500 ng),轻弹使混合均匀;
2. 冰中孵育5 min,液氮中放置5 min,放37℃水浴锅中热激5 min,立即插入冰中静置5 min;
3. 添加900 μL YEB液体培养基,28℃摇床220 rpm培养2-3 h;
4. 5000 rpm离心,倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,28℃培养箱放置2-3天。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 利福平使用浓度<25 μg/ml,链霉素使用浓度<50 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率;Ti质粒丢失概率极低,可不用链霉素,以提高转基因效率。