Biorabbit-GT115化学转化感受态使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌GT115（基因型：F- mcrA∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) f80lacZDM15∆lacX74 recA1 rpsL (Str^R) endA1 ∆dcm uidA(DMluI)::pir-116∆sbcC-sbcD）制作的高效感受态，是专门用来克隆含有发夹结构（Hairpin）或重复序列等DNA二级结构的基因序列的大肠杆菌菌株。大肠杆菌中存在一种SbcCD蛋白复合体，可以识别DNA发夹结构，并将其切除；将sbcC和sbcD两个基因突变，增强了发夹结构DNA的稳定性。同时在大肠杆菌基因组中引入uidA(DMluI)::pir-116，使GT115可以表达兀蛋白，含有R6Kg ori复制子的质粒( pCpGmcs、pCpG-LacZ、pCpG-siRNA …)可以正常复制。该菌株还含有具有核酸酶(endA)突变、重组酶 (recA)突变，增强了外源DNA的稳定性。GT115感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>2×10⁸ cfu/μg DNA。

² 产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

² 转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。