DH5α λpir化学转化感受态使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌DH5α λpir（基因型：F- φ80 lac ZΔM15 Δ(lacZYA-arg F) LAMpir U169 endA1 recA1 hsdR17(rk-,mk+) supE44 λ- thi-1 gyrA96 relA1 phoA

）制作的高效感受态，菌株来源于DH5α，在DH5α大肠杆菌基因组中引入LAMpir，即为 DH5α λpir，该菌株可以表达PIR蛋白，使得含有R6Kg ori复制子的质粒可以在其中正常复制。DH5α λpir菌株缺失核酸内切酶 (endA)，提高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型 (recA)减少插入片段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZΔM15的存在使DH5α可用于蓝、白斑筛选；但 DH5α λpir菌株生长速度较慢，在平板培养或液体摇菌时应延长生长时间。DH5α λpir感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转

化效率>1×109 cfu/μg DNA。

² 产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

² 转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。