使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌SURE（基因型：E. coli B e14-(mcrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC muC::Tn5(Kan^R) uvrC [F´ proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^R)]）制作的高效感受态，真核生物DNA 存在较多“十字型”、“Z 字型”等二级或三级结构，这种DNA 结构在利用传统大肠杆菌进行克隆时易被大肠杆菌体内的重组酶系统或其他防御系统识别并对其进行重组，删除等破坏，导致很难对这类DNA 进行正确的克隆操作。SURE菌株可以解决这些问题：此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，并且 (mcrA-, mcrCB-, mcrF-,mrr-, hsdR-)这些限制性突变的存在赋予此菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recB recJ)突变，增强了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacI^qZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选；Kan^R，Tet^R赋予菌株卡那霉素和四环素抗性。SURE感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>5×10⁸ cfu/μg DNA。

² 产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

² 转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。