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Stbl2

使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌Stbl2(基因型:F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB))制作的高效感受态,菌株来源于 JM109 ,适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列,逆转录病毒序列等);mcrA 突变和mcrBC-hsd RMS-mrr基因缺失使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列;同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>109 cfu/μg DNA。

 

² 产品规格

 

品名

货号 

规格

Stbl2化学转化感受态

EC024H-S

10×100 μL


EC024H-M

50×100 μL

-80℃(12个月)

 

² 转化方法

1. -80 冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min

2. 42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min 

3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min当质粒中含有不稳定片段时,30℃复苏可降低错误重组的概率,

4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率

 

² 注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。

3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。