使用说明
² 产品简介
本品为大肠杆菌Stbl2(基因型:F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr) recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB))制作的高效感受态,菌株来源于 JM109 ,适合克隆不稳定插入片段 (正向重复序列,逆转录病毒序列等);mcrA 突变和mcrBC-hsd RMS-mrr基因缺失使该菌株更适于克隆甲基化的基因组序列;同时Stbl2也可用于慢病毒载体的构建。recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。Stbl2感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>109 cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
Stbl2化学转化感受态 | EC024H-S | 10×100 μL |
| EC024H-M | 50×100 μL |
-80℃(12个月)
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min(当质粒中含有不稳定片段时,30℃复苏可降低错误重组的概率,);
4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜(当质粒中含有不稳定片段时,30℃培养可降低错误重组的概率)。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。