使用说明
² 产品简介
本品为大肠杆菌HB101(基因型:F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1 rpsL20 (strR) glnV44λ-)制作的高效感受态,是K 12和B菌株的杂合产物(同时也是Stbl3的原始菌株)。recA13突变可有效抑制长片段末端重复区的重组,降低错误重组的概率;但不含核酸酶endA1突变,体内核酸酶含量较高,提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失内切酶系统,增强了外源DNA的稳定性和提取质量;此菌株具有链霉素抗性;不存在lacIqZΔM15,不可用于蓝、白斑筛选。HB101感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19 质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>5×108 cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
HB101化学转化感受态 | EC014H-S | 10×100 μL |
| EC014H-M | 50×100 μL |
-80℃(12个月)
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min;
4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。