使用说明
² 产品简介
本品为大肠杆菌DH10B(基因型:F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) ϕ80lacZΔM15ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galE15 galK
λ-rpsL nupG)制作的高效感受态,菌株来源于MC1061菌株,mcrA、mcrBC及 mrr突变使DH10B菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B)。recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。ϕ80lacZ∆M15的存在使DH10B可用于蓝白斑筛选,rpsL赋予其链霉素抗性。DH10B感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
² 产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
DH10B化学转化感受态 | EC005H-S | 10×100 μL |
| EC005H-M | 50×100 μL |
保存条件:-80℃(12个月)
² 转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒或连接产物,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min;
4. 离心(质粒转化无需离心,吸取100μL菌液涂布即可),倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。
² 注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。