使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌BL21{基因型:E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-) gal [malB+]K-12(λS)}制作的感受态。BL21是最早开发的用于原核表达的菌株,BL21 (DE3)、Rosetta、OrigamiB (DE3)等菌株均由该菌株改造而来;该菌株不含有T7 RNA聚合酶,不能用于T7启动子驱动的蛋白表达(如:PET系列质粒);该菌含有大肠杆菌RNA聚合酶,可用于tac或trc等使用大肠杆菌RNA聚合酶的原核表达系统(如:pGEX和pMAL等质粒);pUC19 质粒检测转化效率>107 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
BL21化学转化感受态 | EE005-H-S | 10×100 μL |
| EE005-H-M | 50×100 μL |
-80℃(12个月)
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min;
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。