使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌BL21(AI){基因型:F- ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm araB::T7RNAP-tetA}制作的感受态。BL21(AI)是大肠杆菌B/r型菌株(E.coli B/r),来源于BL21菌株,为Lon蛋白酶和膜外蛋白酶OMPT的缺陷型菌株,这两种酶的缺失有效防止异源蛋白在大肠杆菌体内的降解。在培养基中添加L-阿拉伯糖可诱导araBAD启动子下游T7RNA聚合酶的表达进而促进目的蛋白的表达。在培养基中添加葡萄糖可抑制araBAD启动子下游T7RNA 聚合酶的表达进而抑制目的蛋白的表达。BL21(AI) 感受态细胞适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,能够进行高水平的重组蛋白表达。因为菌株能够对体内的T7 RNA聚合酶水平进行高效调节,BL21(AI)感受态细胞能够表达对其他BL21细胞有毒性或抑制生长的蛋白。普通重组蛋白在BL21(AI)菌株中获得产量和其他BL21菌株产量相当;对大部分毒性蛋白,在BL21(AI) 菌株中获得的产量高于BL21(DE3)pLysS菌株或BL21(DE3)菌株。BL21(AI) 感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
BL21(AI)化学转化感受态 | EE006-H-S | 10×100 μL |
| EE006-H-M | 50×100 μL |
保存条件:-80℃(12个月)
三、转化方法
1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃ 摇床200 rpm培养60 min;
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板(若质粒浓度较高,需要稀释后涂板),37℃ 培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。