使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌HT115(DE3){基因型:F- mcrA mcrB,IN(rrnD-rrnE)1 rnc14::Tn10(DE3 lavUV5::T7 polymerase)}制作的感受态。该菌株是一类特殊的RNase III缺陷型大肠杆菌菌株,可以饲喂线虫,主要用于秀丽隐杆线虫(C. elegans)的RNAi干扰试验。该菌株可以在LB或2YT培养基中正常生长,Tn10转座子的存在使其具有四环素抗性。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,在IPTG存在时可诱导T7 RNA聚合酶大量表达,进而启动线虫ds RNA的表达),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,除了用于线虫 RNAi干扰试验,也可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。HT115(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
HT115(DE3)化学转化感受态 | EE016-H-S | 10×100 μL |
| EE016-H-M | 50×100 μL |
-80℃(12个月)
三、转化方法
1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃ 摇床220 rpm培养60 min;
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板,37℃ 培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。