使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌Rosetta(DE3) [基因型：F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm(DE3) pRARE(argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL) (CamR)]制作的高效感受态。该菌具有氯霉素抗性(CamR)；补充了大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，有利于真核基因的表达；整合了λ噬菌体DE3区（该区域含有T7噬菌体RNA聚合酶）；同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，可用于PET、pGEX和pMAL等质粒的蛋白表达。pUC19 质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
Rosetta（DE3）化学转化感受态 | EE025-H-S | 10×100 μL |
| EE025-H-M | 50×100 μL |
-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。