使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌Rosetta(DE3)pLysS{基因型：F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm(DE3)pLysSRARE(CamR)}制作的感受态。Rosetta(DE3)pLysS菌株携带pLysSRARE质粒，具有氯霉素抗性。pLysSRARE含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA 聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG 诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白；pLysSRARE同时补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因，尤其是真核基因在原核系统中的表达水平，该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。Rosetta(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
Rosetta(DE3)pLysS化学转化感受态 | EE026-H-S | 10×100 μL |
| EE026-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃ 水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。