使用说明
一 产品简介
本品为大肠杆菌T7 Express lysY{基因型:MiniF lysY (CamR)/fhuA2 lacZ::T7 gene1 [lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm] R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 ∆(mcrC-mrr)114::IS10}制作的感受态。该菌种是BL21菌株的衍生菌株,广泛用于蛋白的原核表达。T7 Express lysY是Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株,可促进表达蛋白的稳定。fhuA2突变赋予T7 Express lysY菌株对噬菌体T1的抗性。T7 Express lysY菌株含有lysY质粒( lysY质粒具有氯霉素抗性),lysY质粒含有表达T7溶菌酶的基因,能够降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。染色体整合了T7噬菌体RNA聚合酶,可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。T7 Express lysY感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒(2686bp,AmpR)检测转化效率>1×108 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
T7 Express lysY化学转化感受态 | EE037-H-S | 10×100 μL |
| EE037-H-M | 50×100 μL |
-80℃(12个月)
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒,轻弹使混合均匀,并在冰中孵育30min;
2. 放42℃水浴锅中热激90 s,立即插入冰中静置2-3 min;
3. 添加900 μL LB液体培养基,37℃摇床220 rpm培养60 min;
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板,37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时,IPTG 浓度可选(0.1-2 mM 均可)。