使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌Rosetta-gami 2(DE3)pLysS [基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac+ lacIq pro] gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2 (CamR, StrR, TetR)
]制作的高效感受态。该菌株聚合了不同原核表达菌株的优点：＊Rosetta-gami2赋予其Rosetta2和Origami2的优点——补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA,CUA, CCC, GGA, CGG)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。＊该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。＊该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami2(DE3)pLysS菌株具有氯霉素，链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。Rosetta-gami 2(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>107 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
Rosetta（DE3）化学转化感受态 | EE025-H-S | 10×100 μL |
| EE025-H-M | 50×100 μL |
-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。