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EHA105

使用说明

一、产品简介

    本品为杆菌EHA105(基因型:C58 (rifR) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine)制作的感受态,株由EHA101菌株改造而来,为C58型背景,核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif,为了便于转化操作,此菌株携带一无自身转运功能的琥珀碱型Ti质粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA),此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件,pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏,但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)EHA105菌株适用于水稻、烟草等植物的转基因操作。本公司生产的EHA105化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(12739bpKanR)检测转化效率>104 cfu/μg DNA

 

二、产品规格

 

品名

货号 

规格

EHA105化学转化感受态

AT002-H-S

10×100 μL


AT002-H-M

50×100 μL

保存条件:-80℃(12个月)

 

三、转化方法

1. -80 冰箱中取出感受态细胞,放入冰中5 min,加入目的质粒(约500 ng轻弹使混合均匀;

2. 冰中孵育5 min,液氮中放置5 min37℃水浴锅中热激5 min,立即插入冰中静置min 

3. 添加900 μYEB液体培养基,28℃摇床220 rpm培养2-3 h

4. 5000 rpm离心,倒掉上清,余下菌液均匀涂布抗性平板,28℃培养箱放置2-3

 

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用,不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞,用手指轻弹混匀即可。

3. 利福平使用浓度<25 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长,会降低其生长速度和转化效率。