使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌TKB1{基因型：E. coli B F- dcm ompT hsdS(rB- mB-)galλ(DE3) [pTK TetR]}制作的感受态。该菌种是BL21(DE3)菌株的衍生菌株，广泛用于蛋白的原核表达实验，该菌株表达的蛋白可以在潜在的酪氨酸位点完成磷酸化，提高原核表达蛋白的可溶性和有功能蛋白的大量纯化。将酪氨酸激酶Tyrosine Kinase(TK)基因连入可诱导的启动子构建质粒，并将该质粒命名为pTK；pTK质粒转入BL21(DE3)菌株，命名为TKB1菌株。TKB1为Lon和OmpT蛋白酶缺陷型菌株，可促进表达蛋白的稳定；同时该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7 噬菌体RNA聚合酶，整合于大肠杆菌的染色体上)，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶， 用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达。TKB1感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
TKB1化学转化感受态 | EE034-H-S | 10×100 μL |
| EE034-H-M | 50×100 μL |
-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。