使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌W3110(DE3){基因型：F- λ- rph-1 INV(rrnD, rrnE)(DE3)(CamR) }制作的感受态。该菌种是K-12的衍生菌株，是一种经过较少改造，比较接近于“WT-野生型”的大肠杆菌工程菌株，基因组与MG1655菌株高度相似（与MG1655基因组相比，有8个位点的基因突变）。W3110(DE3)菌株在液体培养时可耐受更高的菌体浓度，同时蛋白产量明显高于其他原核表达菌株，可作为蛋白表达的宿主菌株使用，提高菌体和蛋白产量。W3110(DE3)菌株染色体整合DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，该区整合于大肠杆菌的染色体上，可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等质粒的蛋白表达，W3110(DE3)菌株具有氯霉素抗性，不含核酸酶endA1突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液尽量去除核酸酶，以防提取的 质粒被降解。W3110(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19 质粒（2686bp，AmpR）检测转化效率>1×107 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
W3110(DE3)化学转化感受态 | EE038-H-S | 10×100 μL |
| EE038-H-M | 50×100 μL |
-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。