使用说明
一、产品简介
本品为农杆菌GV3101（基因型：C58 (rifR) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gentR) Nopaline）制作的感受态，菌株为 C58 型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pMP90(pTiC58DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90(pTiC58DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 质粒含有筛选标签：gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗性，适用于拟南芥、烟草、玉米、土豆等植物的转基因操作。本公司生产的 GV3101化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，pCAMBIA2301质粒（12739bp，KanR）检测转化效率>104 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
GV3101化学转化感受态 | AT003-H-S | 10×100 μL |
| AT003-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒（约500 ng），轻弹使混合均匀；
2. 冰中孵育5 min，液氮中放置5 min，放37℃水浴锅中热激5 min，立即插入冰中静置5 min；
3. 添加900 μL YEB液体培养基，28℃摇床220 rpm培养2-3 h；
4. 5000 rpm离心，倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，28℃培养箱放置2-3天。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 利福平使用浓度<25 μg/ml，庆大霉素使用浓度<50 μg/ml。过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率；Ti质粒丢失概率极低，可不用庆大霉素，以提高转基因效率。