HMS174 (DE3)化学转化感受态使用说明

²  产品简介

本品为大肠杆菌HMS174 (DE3)（基因型：K-12,F-,λDE3[lacI,lacUV5-T7gene1,ind1,sam7,nin5],recA1,hsdR19,IN(rrnD-rrnE)1,rph-1,rpoB331(rif^R)）制作的高效感受态，该菌株源于大肠杆菌K12菌株，含有RecA突变。对于能够导致DE3噬菌体损失的特定基因，该菌株能够稳定表达这种基因。DE3是溶源性的λDE3，带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝，可在IPTG诱导下表达T7 RNA聚合酶。HMS174 (DE3)具有完整的乳糖代谢途径，故在诱导蛋白表达时，可以用乳糖同时作为唯一碳源和诱导剂，因此不需要IPTG作为诱导剂，成本比BL21(DE3)以葡萄糖做碳源，以ITPG做诱导剂的表达模式低，适合工业级大规模表达外源蛋白。该菌株同时具有利福平抗性。HMS174 (DE3)是染色体上携带lacUV-T7 RNA聚合酶基因的专门用于蛋白表达的K-12菌株。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体，与BLR(DE3)类似。经pUC19 质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>1×10⁷ cfu/μg DNA。

²  产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

²  转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒或连接产物，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min；

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床220 rpm培养60 min；

4. 离心（质粒转化无需离心，吸取100μL菌液涂布即可），倒掉上清，余下菌液均匀涂布抗性平板，37℃培养箱放置过夜。

²  注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 质粒使用量<50 ng即可获得很好的转化。