使用说明

² 产品简介

本品为大肠杆菌SURE（基因型：E. coli B e14^-(mcrA^-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kan^r) uvrC [F´ proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^R)]）制作的电击感受态细胞，只能用于电击转化，不能用于热激转化。真核生物DNA存在较多“十字型”、“Z字型”等二级或三级结构，这种DNA结构在利用传统大肠杆菌进行克隆时易被大肠杆菌体内的重组酶系统或其他防御系统识别并对其进行重组，删除等破坏，导致很难对这类DNA进行正确的克隆操作。SURE菌株可以解决这些问题,此菌株体内重组酶系统整条通路被破坏，并且(mcrA^-, mcrCB-, mcrF-, mrr-, hsdR-)这些限制性突变的存在赋予此菌株无法对外源DNA进行标记、限制，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同时具有核酸酶 (endA)突变、重组酶 (recB recJ)突变，增强了外源DNA的稳定性。存在于F´因子上的lacI^qZΔM15基因使此菌株可以进行蓝白斑筛选；Kan^R，Tet^R赋予菌株卡那霉素和四环素抗性。SURE电击感受态细胞经特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>0.5×10¹⁰ cfu/μg DNA。

² 产品规格

-80℃（12个月）

² 转化方法

1.取适量LB放37度预热1-2小时（每管感受态准备10mlLB）。

2. 0.1 cm电击杯和杯盖从储存液中拿出倒置于干净的吸水纸上5分钟沥干水分，正置5分钟，待乙醇挥发干净立即插入冰中，压实冰面，电击杯顶离冰面0.5 cm以方便盖上杯盖，冰中静置5分钟充分降温。

3.取-80℃保存的电击感受态细胞插入冰中5分钟，待其融化，加入目的DNA (质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，避免产生气泡，立即插入冰中。

4.用200 ul枪头(用刀切除0.5cm枪尖)将感受态-DNA 混合物快速移到电击杯中（避免产生气泡），轻轻晃动使液面保持水平状态，盖上杯盖，插入冰中。

5.启动电转仪，根据仪器要求设置参数，将电击杯从冰中拿出，用吸水纸擦拭表面，吸干表面水渍，放入电转槽中，电击完成后拿出电转杯放室温，打开杯盖，15秒内加入100ul预热的LB（此步骤可在电转仪旁操作，无需在超净台操作），用1ml枪吹吸电击杯底部2-3次，混匀后转移到50 ml离心管，向离心管中补加LB培养基至10 ml。37℃，220 rpm 复苏60分钟。

6.5000rpm离心一分钟收菌，留取100-200ul菌液重悬后涂布到含相应抗生素的平板上。将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养12-16小时。

注意事项

1.加入DNA时体积不应大于感受态体积的1/10。

2.电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

3. 当DNA不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和DNA的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5.若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

6.对于连接产物，最好用膜纯化或乙醇沉淀法纯化DNA后用适量ddH2O或TE缓冲液(10 mM Tris HCl, pH7.5;1 mM EDTA)重悬产物，保证DNA浓度不超过100 ng/ul。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

8. 电击感受态细胞最好保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。