使用说明
一、产品简介
本品为大肠杆菌ArcticExpressive（DE3）{基因型：E. coli B F- Lon ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA1 Hte [cpn10 cpn60 GentR]}制作的感受态。该菌株为大肠杆菌B株系，缺失Lon和OmpT蛋白酶，提高了表达蛋白的稳定性；菌株整合了λ噬菌体DE3区域，可表达T7 RNA聚合酶，含T7启动子的质粒可在该菌种表达蛋白；菌株含有四环素和庆大霉素抗性；endA1突变，有利于质粒稳定；Hte有利于转化大质粒；菌株可以表达Cpn10 和Cpn60伴侣蛋白，两个伴侣蛋白在4-12℃有较高的活性，可降低重组蛋白包涵体的形成，提高可溶蛋白表达量，并且这两个伴侣蛋白优于GroEL、GroES等传统伴侣蛋白。pUC19 质粒检测转化效率>108 cfu/μg DNA。
二、产品规格
品名 | 货号 | 规格 |
ArcticExpressive（DE3）化学转化感受态 | EE001-H-S | 10×100 μL |
ArcticExpressive（DE3）化学转化感受态 | EE001-H-M | 50×100 μL |
保存条件：-80℃（12个月）
三、转化方法
1. 从-80 ℃ 冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；
2. 放42℃ 水浴锅中热激45 s，立即插入冰中静置2-3 min；
3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃ 摇床200 rpm培养60 min；
4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃ 培养箱放置过夜。
四、注意事项
1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。
2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。
3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。