使用说明

一、产品简介

    本品为大肠杆菌Rosetta-gami(DE3)pLysS{基因型：Δ(ara-leu)7697 ΔlacX74 ΔphoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL(DE3) F´[lac⁺ lacI^q pro] gor522::Tn10 trxB::kan pLysSRARE (Cam^R, Str^R, Tet^R)}制作的感受态。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株聚合了不同原核表达菌株的优势：＊Rosetta-gami 赋予其Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA,CCC, GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase) (trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase) (gor)基因，它们是还原途径的两个关键酶，其突变有利于高效形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。＊该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)适合T7启动子诱导的蛋白表达。＊该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素，氯霉素，链霉素，四环素抗性，为亮氨酸生长缺陷型菌株。Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒（2686bp，Amp^R）检测转化效率>10⁷ cfu/μg DNA。

二、产品规格

保存条件：-80℃（12个月）

三、转化方法

1. 从-80 ℃冰箱中取出感受态细胞，放入冰中5 min，加入目的质粒，轻弹使混合均匀，并在冰中孵育30min；

2. 放42℃水浴锅中热激90 s，立即插入冰中静置2-3 min； 

3. 添加900 μL LB液体培养基，37℃摇床200 rpm培养60 min；

4. 吸取100μL菌液均匀涂布抗性平板（若质粒浓度较高，需要稀释后涂板），37℃培养箱放置过夜。

四、注意事项

1. 感受态细胞解冻后应立即使用，不可在冰中放置过长时间。

2. 不能用移液器抽吸感受态细胞，用手指轻弹混匀即可。

3. 诱导蛋白表达时，IPTG 浓度可选（0.1-2 mM 均可）。